猴头菇体外抑制幽门螺杆菌的研究（2010）

研究机构：中国科学院上海生命科学研究院

摘要：全球约2/3的人口感染幽门螺杆菌（Helicobacter pylori），其中约10％会致病。现已确认幽门螺杆菌是慢性活动性胃炎的病原菌，是消化性溃疡的重要致病因子。长期大量的临床实践表明，中药猴头菌片单独或辅助其它化学药物，对治疗慢性胃炎、消化不良，预防及治疗胃、十二指肠溃疡复发等疾病有确切的良好疗效。在猴头菇(Hericium erinaceum)----慢性胃炎和消化性溃疡----H.pylori三者中，已经基本建立了其中的两对关系，但对猴头菇----H.pylori之间的关系尚不清楚。那么，猴头菇有没有抑制H.pylori的作用？相关活性的物质基础是什么？本文就这两个问题进行了研究。结果表明：猴头菇菌丝、发酵液及子实体均具有抑制幽门螺杆菌体外生长的作用；猴头菇中起抑菌作用的成分是醇溶性小分子而非多糖等大分子；从猴头菇子实体中新发现两种猴头菇酮类化合物:猴头菇酮K(hericenone K)和猴头菇酮L(hericenone L)；猴头菇子实体中产生的可以抑制幽门螺杆菌体外生长的化合物包括：已知化合物麦角甾醇、猴头菇碱(hericerin)及新发现的猴头菇酮K和L(hericenone K和hericenone L)。主要研究内容包括：

（1）比较了22株不同来源供试猴头菌菌株的菌丝生长、子实体产生等生物学性状及其ITS序列。结果显示，供试猴头菇菌株的菌丝在马铃薯葡萄糖培养基(PDA)上的生长状态主要可分为快生型和慢生型两种类型。猴头菇菌株0605在葡萄糖酵母提取物培养基摇瓶发酵过程中，前12d培养液的pH值由初始的6.0逐渐下降到4.4左右，此后酸度波动幅度加剧;残糖则在约第15d左右降至基本为0，与此同时，菌丝生物量从第4d开始增加，至14d达到一个峰值后有所下降，在第约17d-19d时又攀高。参试绝大多数猴头菇菌株在以棉籽壳、麸皮为主要原料的培养料中生长较快，且菌丝致密粗壮。多数菌株子实体发育良好，其中又以0629等2个菌株菌丝长速快、现蕾早、菇形大，形态好，可以做为子实体生产的优良品种。序列分析表明，供试22株猴头菇菌株ITS/5.8S rDNA区域的碱基序列与GeneBank中已经登录的猴头菇H.erinaceum菌株相应序列相似程度最高（可达99％），与猴头菇属其它种差别较大。首次发现供试猴头菌各菌株ITS区域的3个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）位点:位于ITS1区的第48位碱基、ITS2区第444位碱基各有一个T/C位点，ITS2区第521位一个C插入/缺失位点。综合分析猴头菇菌株在菌丝生长、子实体形态等生物学性状及其ITS序列，表明这些菌株为猴头菇菌株无误，为开展进一步的研究奠定较好基础。

（2）应用培养基微量稀释法、打孔法和菌丝牒法等抑菌方法，检测了猴头菇（Hericium erinaceum）菌丝和发酵液、猴头菇子实体和发酵液的醇提取物、中药猴头菌片醇提取物和猴头菌粗多糖及灵芝(Ganoderma lucidium)、金针菇（Flammulina velutiper）、蛹虫草（Cordyceps militaris）、杏鲍菇（Pleurotus eryngii）、茶树菇(Agrocybe aegerita)、香菇（Lentinula edodes）、巴西蘑菇(Agaricus blazei)、平菇（Pleurotus ostreatus）、毛头鬼伞（Coprinus comatus）、双孢蘑菇(Agaricusbisporus)、灰树花（Grifola frondosa）、桑黄（Phellinus igniarius）、蟹味菇（Hypsizygus marmoreus）等另外13种食药用菌子实体乙醇提取物对H.pyloriATCC43504、H.pylori SS1、金黄葡萄球菌Staphylococcus aureus CMCC26003、大肠杆菌Escherichia coli CMCC44103和E.coli ATCC25922体外生长的抑制情况。结果表明:1）供试食药用菌子实体乙醇提取物样品对三种细菌的抑菌表现不同:在约10mg/mL的浓度下，所有样品对两株E.coli CMCC44103和ATCC25922均无抑菌活性;仅猴头菇和灵芝提取物对S.aureus CMCC26003有抑菌活性;除双孢蘑菇和金针菇外的其它12种食药用菌乙醇粗提物对H.pylori ATCC43504和H.pylori SS1的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC)在1 mg/mL-5mg/mL之间。检测猴头菇各提取物样品对H.pylori和S.aureus的MIC，结果显示:经过进一步提取的猴头菇子实体精提取物对H.pytoriATCC43504、H.pytori SS1和S.aureus CMCC26003的MIC分别为＜1 mg/mL、＜1mg/mL和4-8mg/mL，发酵液精提物对三株菌的MIC分别为＜1mg/mL、＜1.4mg/mL和1-2mg/mL，其中一种猴头菌片醇提物对三株菌的MIC分别为2.5-5mg/mL、2.5-5mg/mL和5-10mg/mL;这些提取物对H.pylori的抑菌活性均比对S.aureus强。另一种猴头菌片醇提物和猴头菇粗多糖分别在10mg/mL和22.5mg/mL浓度下未检测到抑菌活性。猴头菇子实体精提物样品对H.pyloriATCC43504的IC50为73.0μg/mL，最低杀菌浓度为200μg/mL。22株猴头菌菌株发酵液正丁醇提取物表现出不同的抑制H.pylori ATCC43504活性。生长时间不同的猴头菇0605菌株PDA菌丝对H.pylori ATCC43504的抑制效果不同，过老或过嫩均未显示出抑菌，“中年”的菌丝表现出较强的抑菌效果;发酵液从第6天开始出现抑菌活性，第10天达到最佳，此后又有所下降，表明猴头菌抑菌成分的产生和分泌与菌株及其菌丝的生长状态密切相关。本部分结果表明猴头菇和灵芝不同于其它常见食药用菌，可产生对H.pylori和S.aureus都有抑菌作用的成分。

（3）以抑菌活性跟踪结合醇提、有机溶剂萃取、硅胶层析、波谱分析等技术研究了猴头菌抑制H.pylori的物质基础。从猴头菇子实体中新发现两种猴头菇酮类化合物:分别命名为猴头菇酮K(hericenone K)和猴头菇酮L(hericenone L)，另分离鉴定出已知化合物麦角甾醇(ergosterol)、猴头菇碱(hericerin)、猴头菇酮A(hericenone A)。新发现猴头菌中麦角甾醇、猴头菇碱和两种新的猴头菇酮混合物对幽门螺杆菌体外生长有抑制作用，其对H.pylori ATCC43504的MIC分别为2.5-5mg/mL、0.25-0.5mg/mL和＜0.3mg/mL。另外，麦角甾醇、猴头菇碱和两种新的猴头菇酮混合物还具有抑制肿瘤细胞L1210增殖的活性。

来源：https://d.wanfangdata.com.cn/thesis/ChJUaGVzaXNOZXdTMjAyMDEwMjgSCFkyNDMxMTAxGgh4ZmdyajZodA%3D%3D

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